PCR基因扩增实验室

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    PCR基因扩增实验室名词解释 ：PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称 。是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段 ，可看作生物体外的特殊DNA复制 。通过DNA基因追踪系统 ，能迅速掌握患者体内的病毒含量 ，其精确度高达纳米级别 ，精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量 、是否复制 、是否传染 、传染性有多强 、是否必要服药 、肝功能有否异常改变能及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物 、判断药物疗效如何 、给临床治疗提供了可靠的检验依据 。

    基因扩增实验又称PCR实验 ，其特点是能将微量的DNA大幅增加 ，PCR是分子生物学研究和实验的常规方法 ，广泛应用于生物学各个领域 ，例如 ：艾滋病检测 、乙型肝炎 、禽疫病 、癌基因的检测和诊断 ，DNA指纹 、个体识别 、亲子鉴定及法医物证 ，动 、植物检疫 ，动物及其衍生产品检测 ，动物饲料 、化妆品 、食品卫生检测 ，转基因作物与转基因微生物检测等 。

    一 、PCR基因扩增实验室必须拥有的条件 ：  

    1 、必须在无菌无尘环境下进行操作 ；  

    2 、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书 ；  

    3 、必须通过国家临床检验中心的验收和认证 ；  

    4 、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求 ；  

    5 、必须拥有标准的的PCR荧光实验室 ；  

    二 、PCR基因扩增实验室建立办法流程 ：  

    1 、建立样品准备区 ；  

    2 、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作 ，这样增加了样品之间污染的机会 。为了避免这一问题 ，反转录一步可以在样品准备区进行 。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道 ；  

    3 、建立前PCR区 ；  

    4 、PCR实验室试剂的操作 ；  

    5 、在前PCR区建立PCR混合物 ；  

    6 、控制污染的方法 ；  

    7、后PCR区PCR完成以后 ，需要分析样品并解释数据 ，应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方 ； 

    PCR实验室布局

    PCR实验室原则上为试剂准备区 、样品制备区 、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有专用走廊 ，各工作区域应设缓冲间 ，工作区与缓冲间宜安装连锁装置 。不同功能的工作区应是分隔独立的 ，各工作区有明显的标志 ，不能直通 ，如果紧密相连 ，需安装物品传递窗 。前两区为扩增前区 ，后两区为扩增后区 ，扩增前区与扩增后区应严格分开 。实验材料 、试剂 、记录纸 、笔 、清洁材料等 ，只能从扩增前区流向扩增后区 ，即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区 ，不得逆向流动 。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区 ，不得逆向流动 。各工作区顶部应安装紫外灯 ，紫外灯的波长为254nm ，每20㎡一支40W的紫外灯 。

验室各区功能及主要设备  

    1 、试剂准备区 ：主要进行试剂的制备 、分装和主反应混合液的制备 。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区 ，不得经过其它区域 。试剂原材料必须贮存在本区内 ，并在本区内制备成所需的试剂 。本区主要设备有天平 、冰箱 、离心机 、加样器 、振荡器等 。  

对于气流压力的控制 ，本区并没有严格的要求 。  

    2 、样品制备区 ：主要进行样品的保存 、核酸(RNA 、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成 。本区主要设备有冰箱 、生物安全柜 、离心机、加样器 、振荡器 、恒温水浴等 。  

本区的压力梯度要求为 ：相对于邻近区域为正压 ，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染 。  

    3 、扩增区 ：主要进行DNA扩增 。此外 ，已制备的DNA模板 (来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行 。本区主要设备有 ：扩增仪 、冰箱 、离心机 、加样器等 。  

本区的压力梯度要求为 ：相对于邻近区域为负压 ，以避免气溶胶从本区漏出 。  

    4 、扩增产物分析区 ：扩增产物的测定 。本区主要设备有酶标仪 、洗板机、加样器和水浴箱等 。  

本区的压力梯度的要求为 ：相对于邻近区域为负压 ，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域 。 

    PCR实验室通风系统及压力控制  

    各区域之间应具备单向的实验工艺流 、物流 、人流与气流 ，形成单向流程的保护屏障 ，避免实验之间的相互干扰 ，防止气溶胶扩散对实验过程造成污染 。  

    PCR实验室并没有严格的净化要求 ，但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性 ，宜采用全送全排的气流组织形式 ，严格控制送 、排风的比例以保证各实验区的压力要求 。  

    PCR实验室装饰  

    实验室围护结构应牢固 、气密性好 ；所有阴阳角宜采用圆弧过渡 ；墙体内壁光洁 、不积尘 、耐腐蚀 、易清洗消毒 ；地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪 ，材料应满足无缝隙 、无渗漏 、光洁 、耐腐蚀的要求 。五 、PCR实验室注意事项  

    1、几个区域的大小设置情况 ，试剂准备区 、扩增区 、扩增产物分析区 ，空间可以相对小一些 ，样品制备区要放置生物安全柜和低温冰箱 ，空间应大一些 。